HEPES是两性离子有机化学缓冲剂，属于二十个 Good 的缓冲区之一，它不与金属离子结合，极易溶于水。经常被添加到细胞培养基中使用。虽然它对细胞没有营养，但是在细胞培养需要在 CO2 培养箱外进行长时间操作时，添加 10–25 mm HEPES 可提供额外的缓冲能力孵化器为细胞提供一个良好的PH环境。

HEPES 缓冲区具有以下特征：

1、HEPES 的 pKa 取决于温度：例如①在 25ºC：pKa= 7.48 ②在 37ºC：pKa= 7.31

2、在水溶液中有良好的溶解性，水溶液无色透明；

3、化学性质稳定，对生物没有毒性且对生物膜无明显的渗透作用：

4、对紫外波无特征吸收，在波长小于230-240nm时才有微弱的吸收，因而不干扰通常的光度法测量。

5、不易受温度、离子组成、浓度等因素影响解离度

HEPES除了在细胞培养基中的使用之外在其他生物研究中，也占有非常重要的地位，因为它不与金属离子结合，所以在很多金属离子研究中都可以使用它，它是三羟氨基甲烷与磷酸盐的良好替代品。HEPES 也是电子显微镜中蛋白质沉积技术的常用缓冲液，因为它不会影响金属基材。经过评估并证明HEPES适合与两性化合物一起使用，为等电聚焦应用产生小于 1 个 pH 单位宽的 pH 梯度。在谷氨酸结合试验的推荐缓冲液中，HEPES也是作为缓冲液，因为它可以防止与非受体材料结合。

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